Topmusicanswers
Reguleerige lõõmutamistemperatuure, kuna PCR lisandite või kaaslahustite kõrge kontsentratsioon nõrgendab praimeri sidumist sihtmärgiga. Suurendage DNA polümeraasi kogust või kasutage suure protsessivõimega DNA polümeraase.
...
- Järjestuse vead PCR -toodete otstes.
- Valepositiivne võimendus.
- Ressursid.
- Millised on tavalised tõrkeotsingud, mis võivad PCR -is tekkida?
- Miks mu PCR ei tööta??
- Mis põhjustab PCR -i määrimist??
- Mis juhtub, kui lõõmutustemperatuur on liiga kõrge?
Millised on tavalised tõrkeotsingud, mis võivad PCR -is tekkida?
PCR -i tõrkeotsingu juhend
| Probleem | Põhjused |
|---|---|
| PCR produkti saagis on madal või puudub | Termotsükleriprogrammi lõõmutamine ja pikendamistemperatuur ei ole optimaalsed |
| Reaktsioonis puudub Taq polümeraas või muu reaktsioonikomponent | |
| Praimeri kontsentratsioon on liiga madal | |
| Sihtjärjestus ei ole DNA mallis |
Miks mu PCR ei tööta??
Kui unustate ainult ühe PCR -reaktsiooni komponendi, olgu see siis DNA polümeraas, praimerid või isegi matriits -DNA, põhjustab see ebaõnnestunud reaktsiooni. Lihtsaim lahendus on reaktsiooni korrata. ... Kui pärast seda pole veel PCR -produkti, on tõenäoline, et teie reaktsiooni takistab miski muu.
Mis põhjustab PCR -i määrimist??
DNA saastumine, RNA DNA proovis, DNA kõrge kontsentratsioon PCR reaktsioonis võib põhjustada määrimist. ... DNA määrimine tekib tavaliselt taimedes matriitsi DNA suure kontsentratsiooni tõttu.
Mis juhtub, kui lõõmutustemperatuur on liiga kõrge?
Lõõmutustemperatuur oli liiga kõrge
Kui lõõmutamistemperatuur on liiga kõrge, ei suuda praimerid malliga seonduda. Rusikareegel on kasutada lõõmutamistemperatuuri, mis on 5 ° C madalam kui Tm praimerist.
