Topmusicanswers
- Miks PCR -is võimendust ei toimu??
- Miks mu DNA ei võimendunud??
- Mis juhtub, kui PCR -ile ei lisata praimereid?
- Kuidas määrata PCR -is mittespetsiifiline võimendus??
Miks PCR -is võimendust ei toimu??
Kui malli esialgne kogus on liiga väike, võib tulemuseks olla ebapiisav võimendus. Suurendage võimendustsüklite arvu 5 sammuga või võimalusel suurendage malli kogust. Saasteained dNTP segus võivad põhjustada mittetäieliku või vale amplifikatsiooni või PCR inhibeerimise. Kasutage kvaliteetseid dNTP-sid.
Miks mu DNA ei võimendunud??
1) teil võib olla praimeri disain või reaktsiooni standardimine halb (hinnake oma praimeri disaini ja tehke, nagu teised juba ütlesid, gradient -PCR, et hinnata erinevaid lõõmutamistempe); 2) DNA -d pole (teie ekstraheerimisprotokoll võib olla ebaõnnestunud) ja nii saavad teie praimerid üksteisega ainult lõõmutada (või neid amogida).
Mis juhtub, kui PCR -ile ei lisata praimereid?
Küsimus: Kui unustasite oma PCR reaktsioonile praimerid lisada, mis juhtuks ja miks? 1. Teie reaktsioon ebaõnnestub, kuna Taq polümeraas ei saa aluseid lisada ilma väikese DNA -tükita. ... Teie reaktsioon ebaõnnestuks, kuna poleks ensüüme, mis võiksid lisada uusi nukleotiidialuseid.
Kuidas määrata PCR -is mittespetsiifiline võimendus??
Kasutage vähem tsükleid, kui malli kontsentratsioon on kõrge, ja rohkem tsükleid, kui malli kontsentratsioon on madal. 2. Pikendusaeg oli liiga pikk: liigne pikendusaeg võib lubada mittespetsiifilist võimendust. Üldiselt kasutage pikendamisaega 1 min/kb.
