Võimendusprobleemid

1. Millised probleemid võivad tekkida PCR amplifikatsioonist??
2. Miks PCR -is võimendust ei toimu??
3. Mis põhjustab amplifikatsiooni PCR -is?
4. Mis põhjustab PCR ebaõnnestumist?

Millised probleemid võivad tekkida PCR amplifikatsioonist??

Paljud PCR-i ja RT-PCR-i tavalised probleemid tuvastatakse reaktsioonisaaduste agaroosgeelelektroforeesi ajal. Nende hulka kuuluvad eeldatava võimendusprodukti puudumine, mittespetsiifiliste toodete olemasolu, liigne määrimine ja praimeri dimeerriba olemasolu.

Miks PCR -is võimendust ei toimu??

DNA polümeraasi ensüüm ei tööta

DNA polümeraasi ensüüm vastutab seotud praimerite pikendamise eest piki matriitsi DNA ahelaid. Kui see ensüüm ei ole enam nii tõhus, võib-olla külmutamise-sulatamise tõttu, on PCR-reaktsiooni pikendamisetapp mittetäielik, andes teile PCR-produkti.

Mis põhjustab amplifikatsiooni PCR -is?

Põhiline PCR. PCR -protsess töötati algselt välja pikema DNA molekuli lühikeste segmentide võimendamiseks (Saiki et al. 1985). Tüüpiline amplifikatsioonireaktsioon hõlmab sihtmärk -DNA -d, termostabiilset DNA polümeraasi, kahte oligonukleotiidpraimerit, deoksünukleotiidtrifosfaate (dNTP -sid), reaktsioonipuhvrit ja magneesiumi.

Mis põhjustab PCR ebaõnnestumist?

Tavaliselt süüdistavad teadlased esimest korda vigase ensüümi või reaktiivi, kui katse ebaõnnestub, kuid PCR -i puhul on see tõenäoliselt ebaõnnestumise põhjus. Sageli on põhjuseks sügavamad sisemised probleemid, nagu praimeri disain, termotsükli parameetrid või mittespetsiifiline seondumine teiste matriitsijärjestustega.